液相色谱柱反冲洗的方法

液相色谱柱反冲洗是***种用于清除柱头污染物的维护方法，需谨慎操作以避免损坏色谱柱。‌核心方法包括使用极性递增的溶剂系列（如水、甲醇、乙腈、异丙醇、二氯甲烷、正己烷）反向冲洗，每种溶剂冲洗10-20倍柱体积，并以异丙醇过渡后恢复初始流动相‌。‌‌

反冲洗操作步骤

‌预处理‌：若流动相含缓冲盐，先用纯水冲洗5-10倍柱体积去除盐分，防止有机溶剂导致盐沉淀。‌‌

‌溶剂冲洗顺序‌：

反向冲洗流速控制在1-2 mL/min（250×4.6 mm柱），避免压力过高。‌‌

溶剂顺序：***水 → ***甲醇 → ***乙腈 → ***异丙醇→ ***二氯甲烷→ ***正己烷。‌‌

每种溶剂冲洗至少10倍柱体积（如250×4.6 mm柱约25 mL）。‌‌

‌过渡与平衡‌：以10倍柱体积异丙醇过渡，再反向切换至初始流动相（不含缓冲盐），***后用起始流动相平衡30分钟。‌‌

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