赛默飞VeritiPro PCR仪标准操作流程
- 2025-09-02 09:12:11
***、 开机准备：环境与耗材合规设置（耗时：<5分钟）
运行环境确认：
设备放置于稳定水平台面 ，散热口预留≥10cm空间 。
环境温度：15–30℃ | 相对湿度：≤80% | 避免强电磁干扰源。
连接稳压不间断电源（UPS） 防止电压波动中断实验。
启动设备：
按下前面板电源键，等待系统自检完成 （约1分钟），触摸屏显示主菜单。
耗材选择与装载：
关键提示： 使用非认证耗材可能导致密封失效、导热不均，影响扩增效率！
仅使用赛默飞认证耗材 （如MicroAmp™ 96孔反应板、0.2mL单管）。
确认反应板/管与热循环模块凹槽匹配 （避免翘曲）。
轻柔平放 反应板至模块中心，确保无倾斜。
二、 程序创建与参数设置（耗时：2-3分钟）
新建程序：
主菜单选择 Protocol → Create New → 输入程序名称（如 SARS-CoV-2_Ngene）
设置温度步骤（核心操作）：
步骤类型 温度 持续时间 循环数 应用场景
预变性 95℃ 3-5分钟 1 模板DNA整体变性
变性 95℃ 30秒 35 双链DNA解离
退火 55-65℃ 30秒 ↑ 引物特异性结合
延伸 72℃ 1分钟/kb ↑ DNA聚合酶合成产物
终延伸 72℃ 5-10分钟 1 补齐末端产物
保存 4-10℃ ∞ 1 产物短期存储
退火温度： 根据引物Tm值优化（推荐赛默飞在线工具[Primer Design Tool ]）
延伸时间： 按扩增片段长度计算（1kb=60秒）
热盖温度设置（防蒸发关键）：
96孔板：High （高压模式）
0.2mL单管：Low （低压模式）
进入 Lid Temperature 选项，设置为 105°C （推荐值）。
适用耗材类型：
三、 启动运行与实时监控（扩增中操作）
启动程序：
装载样本后关闭热盖，点击 Start → 确认程序参数 → 再次点击 Start。
系统自动检测热盖压力，屏幕显示 "Run in Progress" 。
运行监控要点：
温度追踪： 实时显示当前模块温度、目标温度及剩余时间。
异常报警： 若出现 "Lid Open" （热盖未关严）、"Over Temp" （超温）告警，立即暂停检查。
避免干扰： 运行期间勿开启热盖 ，防止温度骤变影响扩增。
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