全自动冰冻切片机的操作指南

全自动冰冻切片机操作指南：从样本制备到安全规范  

***、仪器用途与原理概述  

全自动冰冻切片机通过低温冷冻（-20℃~-30℃）固定组织样本，利用高精度切片刀将冷冻样本切成5-10μm的薄片，适用于病理快速诊断（如术中冰冻病理）、免疫荧光染色等场景。其核心原理是通过低温抑制细胞自溶，保持组织形态结构完整。  

二、操作前准备：环境与样本预处理  

1.仪器环境要求  

温度：实验室室温控制在18-25℃，避免空调直吹仪器导致温度波动。  

电源：使用稳压电源，接地良好，防止静电干扰。  

清洁：用75%乙醇擦拭切片机台面、样本托、刀片架，避免样本污染。  

2.样本预处理  

组织固定：新鲜组织需在30分钟内处理，去除多余脂肪和坏死组织，体积不超过1cm×1cm×0.5cm（过大易导致冷冻不均）。  

冷冻剂准备：常用OCT包埋剂（optimalcuttingtemperaturecompound），或异戊烷+液氮（适用于特殊样本）。  

三、详细操作步骤：分阶段标准化流程  

1.开机与温度设置（以LeicaCM1950为例）  

开机顺序：  

接通电源，打开主机开关，等待系统自检（约2分钟）。  

在触摸屏设置冷冻舱温度（常规-25℃）、样本托温度（-30℃），预冷30分钟至温度稳定。  

参数校准：  

校准切片厚度（常用5μm，神经组织可设为8-10μm），检查刀架角度（推荐5°-8°，角度过大易导致切片褶皱）。  

2.样本包埋与冷冻  

包埋操作：  

在样本托上滴适量OCT，放置组织（切面朝上），用预冷镊子调整位置，避免气泡。  

将样本托放入冷冻台，快速滴加OCT覆盖组织，直至形成均匀包埋块（约3分钟冷冻至固态）。  

冷冻确认：  

轻敲包埋块，若发出清脆声响，表明冷冻充分；若发软，需重新冷冻（可喷液氮辅助，但需避免直接接触组织）。  

3.切片与展片  

装载样本与刀片：  

将冷冻好的样本托固定在样本臂上，调整位置使组织切面与刀片平行。  

安装***次性冰冻切片刀（佩戴防割手套），调节刀片高度至刚接触样本表面。  

自动切片流程：  

按下“开始切片”按钮，仪器自动以设定厚度切取薄片（若切片碎裂，可能因：①样本冷冻不充分；②刀架角度不当；③切片速度过快）。  

用预冷载玻片轻贴切片，靠OCT黏性吸附切片（载玻片需提前在-10℃冰箱预冷）。  

4.切片后处理  

染色准备：  

切片若用于HE染色，需立即放入固定液（4%多聚甲醛）固定10分钟；若用于免疫荧光，可直接放入-80℃保存或立即染色。  

质量检查：  

在显微镜下观察切片平整度、细胞形态（理想切片应无裂痕、细胞无挤压，核浆分明）。  

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