紫外交联仪在测定麦角硫因抑制紫外辐射诱发自由基性能方面的应用
- 2025-03-24 09:19:31
麦角硫因（ergothioneine，EGT）作为***种天然手性氨基酸衍生物，存在硫醇和硫酮两种互变异构形式。研究表明EGT可抑制脂质过氧化损伤，清除羟自由基（·OH）、超氧化物和单线态氧（1O2）等多种活性氧（ROS）物质，是优异的皮肤光敏保护剂。通过紫外线照射光敏剂罗丹明B（RhB）溶液诱发包括1O2在内的自由基体系（简称UV-RhB体系），模拟紫外线照射人体皮肤产生ROS的情况，研究EGT在此体系下的抗氧化性能及其稳定性，以期为EGT应用于抗衰护肤品的开发提供理论依据。
实验方法 1. UV-RhB体系中EGT和VC抗氧化性能的测定 以pH 7.2的磷酸盐缓冲液（PBS，取2.2 g Na2HPO4，0.3 g NaH2PO4和8.5 g NaCl，加水溶解至1000 ml）为溶剂，分别配制0.001 %罗丹明B溶液（RhB）、0~1.00 mg/ml的EGT溶液及维生素C（VC）溶液。按表1配制测定溶液体系I、II，置紫外光（波长254 nm，光强度5 mW/cm2）下照射。分别于0，1 h时，采用酶标仪，测定555 nm波长处吸收值（A0和A1），每个样品平行3份，计算0 h和1 h吸光度变化量的平均值（ΔA），以ΔA空白为基线，按下式计算体系中活性物质的抗氧化性能（F）。F（%）= （ΔA空白-ΔA样品）/ ΔA空白×100 ΔA空白式中，ΔA空白：空白对照溶液的吸收值的变化量（A0空白-A1空白）；ΔA样品：样品溶液的吸收值的变化量（A0样品-A1样品）。 2.离子强度对EGT抗氧化性能的影响 按表1配制测定溶液体系III，EGT溶液浓度为0.25 mg/ml，以EGT浓度为0的体系作为空白对照，分别加入NaCl浓度分别为0 %，0.40 %，0.85 %，1.30 %，1.75 %的PBS。按2.1项下方法平行测定3份，取其平均值，计算不同离子强度体系的ΔA和F值。 按表1配制测定溶液体系IV，EGT溶液浓度为0.25 mg/ml，以EGT浓度为0的体系作为空白对照，用0.1 mol/L HCl溶液和0.1 mol/L NaOH溶液分别调节PBS缓冲液pH值为3.0，5.0，7.2，9.0，11.0。按1项下方法平行测定3份，取其平均值，计算不同pH体系的ΔA和F值。 4.还原剂对EGT抗氧化性能的影响 按表1配制测定溶液体系V，EGT溶液浓度为0.25 mg/ml，并以EGT浓度为0的体系作为空白对照，Na2SO3溶液以PBS缓冲液为溶剂，浓度分别为0 %，0.02 %，0.05 %，0.10 %，0.25 %，0.50 %。按1项下方法平行测定3份，取其平均值，计算不同还原剂浓度体系的ΔA和F值。 5.金属离子对EGT抗氧化性能的影响 按表1配制测定溶液体系VI，其中溶剂为生理盐水，EGT溶液浓度为0.25 mg/ml，并以EGT浓度为0的体系作为空白对照。分别加入0.05 mol/L的K+、Mg2+、Zn2+、Cu2+、Fe3+生理盐水溶液。按1项下方法平行测定3份，取其平均值，计算不同金属离子体系的ΔA和F值。 6.EDTA对EGT抗氧化性能的影响 按表1配制测定溶液体系VII，其中溶剂为生理盐水，EGT溶液浓度为0.25 mg/ml，并以EGT浓度为0的体系作为空白对照。分别加入0.10 mol/L的Fe3+溶液和0 %，0.02 %，0.04 %，0.10 %，0.20 %的EDTA溶液。按1项下方法平行测定3份，取其平均值，计算不同EDTA浓度体系的ΔA和F值。
实验结果 不同浓度EGT和VC的抗氧化性能见图1。由图1可见，0~1 mg/ml范围内，EGT和VC的F值随浓度的升高而增大，且相同浓度下EGT的F值***直高于VC，表明EGT和VC抗氧化作用具有较好的量效关系，同时在此体系下EGT的抗氧化性能优于VC。 离子强度对EGT抗氧化性能的影响见图2。由图2可见，NaCl浓度在0 %~0.85 %范围内，EGT的F值较为稳定，当NaCl浓度高于0.85 %时，F值急剧下降，表明此时EGT抗氧化性能受到体系内高离子强度的抑制而显著降低。 pH值对EGT抗氧化性能的影响见图3。由图3可见，在pH 5~9范围内EGT的F值变化相对较小，表明EGT抗氧化活性在pH 5~9范围内较为稳定。 还原剂亚硫酸钠对EGT抗氧化性能的影响见图4。由图4可见，随着亚硫酸钠浓度的增大，F值呈下降趋势，表明在此体系中加入亚硫酸钠可抑制EGT的抗氧化活性。亚硫酸钠浓度大于0.1 %时，F值趋于稳定，表明其抑制作用趋于平缓。
